基因检测的技术有哪些?

基因异常的形式有很多种,因而进行基因检测的方法也有很多,利用探针的杂交法、借助PCR技术的扩增法以及测序法等。本文将对目前常用的基因检测技术进行介绍:


1.荧光原位杂交(FISH)

荧光原位杂交技术是在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。


FISH的基本原理是用已知的带有荧光标记的单链核酸作为探针,按照碱基互补的原则,与待检材料(组织、细胞)中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸,在荧光显微镜下可在原有的组织和细胞上看到荧光信号。可对DNA序列进行定性、定位、相对定量的分析,包括序列缺失、插入、易位等。



2.基因芯片

基因芯片(genechip),又称DNA芯片、生物芯片。通俗地说,基因芯片就是通过微加工技术 ,将数以万计、乃至百万计的特定序列的DNA片段(基因探针),有规律地排列固定于硅片、玻片等支持物上,构成的一个二维DNA探针阵列。当外界带有荧光标记的核酸序列与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时,通过荧光强度确定探针位置,再对配对部分进行计算及分析,进而确定外界的核苷酸序列。


3.荧光定量PCR(qPCR)

荧光定量PCR技术在PCR反应中加入荧光基因,随着PCR的进行,反应物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。通过检测荧光信号的累积,实时监测整个PCR进程,最后通过数学方法(Ct值、标准曲线)对模板DNA进行定量分析。与传统PCR相比,qPCR耗时短、样品无后期检测,灵敏度和分辨率都更高,且可以做到定量分析。


将逆转录PCR(RT-PCR)与qPCR相结合,将mRNA逆转录为cDNA后再作为模板进行实时荧光PCR分析,即为RT-qPCR,是对mRNA的表达进行定量分析一种常用方法。

4.焦磷酸测序

焦磷酸测序将引物与模板DNA退火后,在DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase)、荧光素酶(luciferase)和双磷酸酶(Apyrase)4种酶的协同作用下,将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号的释放偶联起来,通过检测荧光的释放和强度,达到实时测定DNA序列的目的。



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